плазма кроляча цитратна суха, (113306), Мерк

Bactident® коагулаза
Для виявлення ензиму коагулаза, що виділяється staphylococcus aureus

Спосіб дії
Коагулаза - це ензим, здатний коагулювати плазму. Staphylococcus aureus формує два види коагулазу. Вільна коагулаза - це позаклітинний ензим, а пов\'язана коагулаза розташовується на поверхні стінки клітини. Обидва ензими виявляються в тестовій пробірці. При тесті на предметному склі може виявлятися тільки пов\'язана коагулаза.

Метод
Залишена на ніч бульйонна культура staph. aureus інкубується з повторно гидратированной ЕДТУ кролячій плазмою. Тест на коагулазу позитивний, якщо понад три чверті вмісту пробірки утворюють злиплий грудку.

Стабільність
Див. Термін придатності.
Bactident® коагулаза стабільний протягом 5 діб в розчиненому (повторно гідратованому) стані при + 2 ° C - + 8 ° C. При -20 ° C він зберігає стабільність до 30 діб.

Зберігання
Зберігати в сухому, прохолодному місці, в щільно закритому контейнері при + 2 ° C - + 8 ° C. Зберігати розчинену плазму при + 2 ° C - + 8 ° C або глибокого замороженої при -20 ° C. Після розморожування заморожувати не можна.

Безпечна утилізація
Вміст пробірки включає бактерії, і воно повинно утилізуватися безпечним способом. Цього можна досягти обробкою в автоклаві або приміщенням в 5 - 6% розчин дезинфікуючого засобу не менше, аніж на 6 годин.

Експериментальна процедура
• Проводити тест на коагулазу на 5 типових і / або 5 атипових колоніях на агарі Берд-Паркер (№ у каталозі Merck 1.05406.) Або 5 підозрілих колоніях на інший культуральному середовищі (агар Чепмен № в каталозі Merck 1.05469., Агар ФОГЕЛЯ- ДЖОНСОНА № в каталозі Merck 1.05405., кров\'яний агар (основа), № у каталозі Merck 1.10886.).
• Перенести кожну обрану колонію стерильною бактеріологічною петлею в окремі культуральні пробірки, що містять бульйон з серцево-мозковим екстрактом (№ у каталозі Merck 1.10493.), І інкубувати при 37 ° C протягом 20 - 24 годин.
• Розчинити сублимированную кролячу плазму з ЕДТУ в 3 мл дистильованої або демінералізованої води.
• піпетувати стерильною піпеткою 0,3 мл повторно гидратированной Bactident® коагулазу в стерильну культуральну пробірку.
• Обережно змішати 0,1 мл культури в бульйоні з серцево-мозковим екстрактом і 1/2 бактеріологічної петлі матеріалу колоній з кров\'яного агару Чепмен або агару Берд-Паркер з 0,3 мл плазми і інкубувати в водяній бані при 37 ° C. (Матеріал колоній прямо з культури Фогель-ДЖОНСОНА на маннитол-сольовому агарі з хлоридом натрію і фенольні червоним не підходить для тесту. Спочатку необхідна культура з бульйону з серцево-мозковим екстрактом).
• Раз на годину перевіряти вміст пробірки на предмет коагуляції обережним нахилом (без струшування).
• Тест на коагулазу позитивний, якщо понад три чверті вмісту пробірки утворили злиплий грудку.

Якщо тест негативний після 4 - 6 годин, слід продовжувати інкубувати пробірку і зробити остаточну оцінку через 24 години. В якості негативного контролю потрібно приготувати бульйон з серцево-мозковим екстрактом, але без інокуляції. Ознак комкования бути не повинно.

В якості позитивного контролю слід провести тест з коагулаза-позитивним штамом стафілококів.

негативний коагуляції немає
1 + позитивний кілька маленьких окремих грудок
2 + позитивний кілька маленьких липких грудок
3 + позитивний великі, інтенсивно коагулювати грудки
4 + позитивний повна коагуляція, вміст не переміщається, при перевертанні пробірки

Примітки
Тест на предметному склі, при якому колонія змішується з кролячої плазмою на склі (фактор злипання), виявляє тільки пов\'язану коагулазу і може служити в кращому випадку скринінг-тестом. Можливі помилкові позитивні реакції і неспецифічна аглютинація.