1531 среда Кинг А (Псевдомонас Р агар по USP), 500 г, Conda
Среда для идентификации псевдомонад по продуцированию пиоцианина
Формула в граммах на литр
Панкреатический гидролизат желатина 20,0 Сульфат калия 10,0
Хлорид магния 1,4 Бактериологический агар 13,6
Конечная величина pH 7,0 ± 0,2 при 25°C
Приготовление
Развести 45 г среды в 1 литре дистиллированной воды. Добавить 10 мл глицерина. Тщательно перемешать и нагреть. Часто помешивая, довести до кипения. Кипятить в течение минуты до полного растворения. Разлить в соответствующие емкости и стерилизовать 15 минут при 121°C. Готовая среда имеет янтарную окраску, слегка опалесцирует и должна храниться при 8–15°C.
Использование
Среда Кинга A (Псевдомонадный агар Р) используется для обнаружения и дифференциации Pseudomonas aeruginosa от других псевдомонад на основании продуцирования пиоцианина и ингибирования флуоресцеина (пиовердина).
Pseudomonas aeruginosa – свободно живущая бактерия, обитающая в почве и воде, оппортунистический патоген клинического значения.
Панкреатический гидролизат желатина является источником питательных веществ, необходимых для роста микроорганизмов: азота, витаминов, минеральных солей и аминокислот. Сульфат калия и хлорид магния – поставщики катионов для активации синтеза пиоцианина и увеличения выхода пигмента. Глицерин – источник углерода.
Инокулировать и инкубировать 18–24 часа при 35±2°C.
Среда способствует синтезу пиоцианина – сине-зеленого пигмента, который окисляется с приобретением коричневого цвета. Он растворим в воде и, в отличие от флуоресцеина, растворим в хлороформе. Пигмент диффундирует в среде, окрашивая ее в синий цвет.
Продуцирование пиоцианина подтверждается растворением в хлороформе. Добавить в пробирку со средой 2 мл хлороформа и осторожно встряхнуть для удаления пигмента.
Микробиологический тест
Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах после инкубации при температуре 35±2°C и наблюдались через 18–24 часа.
Микроорганизмы / Рост / Нитрит
• Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 / Хороший / Синий
• Pseudomonas aeruginosa ATCC 25619 / Хороший / Сине-зеленый
• Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 / Хороший / Синий