Агар МакКонки, 500 г Conda 1052

Среда для выделения и идентификации энтеробактерий из фекалий, мочи, сточных вод и пищевых продуктов

Формула в граммах на литр

                          Панкреатический гидролизат желатина   17,0         Моногидрат лактозы                        10,0

                          Хлорид натрия                                                  5,0            Пептоновая смесь

                          Соли желчных кислот                                     1,5            (мясной и казеиновый)                     3,0

                          Нейтральный красный                                    0,03         Кристаллический фиолетовый      0,001

                          Бактериологический агар                              13,50

Конечная величина pH 7,1±0,2 при 25°C

Приготовление

Развести 50 г среды в 1 литре дистиллированной воды. Тщательно перемешать и нагреть. Часто помешивая, довести до кипения. Кипятить в течение минуты до полного растворения. Стерилизовать 15 минут при 121°C. Охладить до 45–50°C, тщательно перемешать и разлить в чашки Петри. Готовая среда должна быть фиолетово-красного цвета и храниться при 8–15°C.

Использование

Агар МакКонки используется для селективного выделения и идентификации энтеробактерий из фекалий, мочи, сточных вод и пищевых продуктов. Также он является селективной и дифференциальной средой для выделения кишечных грамотрицательных бактерий.

Пробу можно посеять штрихом непосредственно на среду или сначала инокулировать в обогатительный бульон (Основа тетратионатного бульона (кат. № 1114), Бульон селенит-цистиновый (кат. № 1220), Бульон МакКонки (кат. № 1210) или Бульон обогатительный для грамотрицательных бактерий (кат. № 1248)). Пересеять культуру из пробирок с бульоном на агар МакКонки и инкубировать повторно 18–72 часа при 30–35°C (согласно рекомендациям Европейской Фармакопеи).

Панкреатический гидролизат желатина и пептоновая смесь являются источниками питательных веществ, необходимых для роста микроорганизмов: азота, витаминов, минеральных солей и аминокислот. Лактоза – ферментируемый углевод, источник углерода и энергии. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. Соли желчных кислот и кристаллический фиолетовый – селективные агенты, ингибирующие грамположитель­ные организмы. Нейтральный красный – индикатор pH. При ферментации лактозы происходит понижение уровня рН, сопровождающееся изменением индикатора в розовый цвет.

Европейская Фармакопея рекомендует следующий тест для обнаружения E.coli. Инокулировать и инкуби­ровать в Триптиказеино-соевом бульоне (кат. № 1224) 18–24 часа при 30–35°C. После чего инокулировать в Бульон МакКонки (кат. № 1210) и инкубировать при 42–44°C в течение 24–48 часов, затем – на чашках с агаром МакКонки 18–72 часа при 30–35°C. Имеющийся рост колоний указывает на возможное присутствие E.coli, для подтверждения необходимо провести идентификационный тест. Выделенные колонии E.coli имеют кирпично-красную окраску и окружены зоной из осадка желчи, который образуется в результате локального падения рН вокруг лактозо-ферментирующих колоний.

Рекомендуется засевать пробы штрихом на другие селективные среды, такие как Агар Сальмонелла Ши­гелла (кат. № 1064), Агар XLD (кат. № 1274), Агар гектоеновый для энтеробактерий (кат. № 1030), Агар висмут-сульфитный (кат. № 1011) – особенно для Salmonella typhi и/или Агар с бриллиантовым зеленым (кат. № 1078) – особенно для сальмонелл.

Характеристики колоний

• E. coli. Красные или розовые; не слизистые; округлые; матовый осадок желчных солей.


• Salmonella spp. Бесцветные, прозрачные или янтарные.


• Klebsiella spp. Крупные, красные, слизистые.


• Shigella spp. Бесцветные, прозрачные или слабо розовые.


• Enterobacter aerogenes. От розового до красного цвета.


• Serratia spp. От красного до розового цвета, не слизистые.


• Arizona spp. и Citrobacter spp. Бесцветные, прозрачные; красные в случае ферментации лактозы.


• Proteus spp. Бесцветные, прозрачные.

Микробиологический тест

Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах после инкубации при температуре 35±2°C и наблюдались через 24 часа.

Микроорганизмы / Рост / Цвет колонии
• Enterobacter aerogenes ATCC 13048 / Хороший / Розово-красный
• Escherichia coli ATCC 25922* / Хороший / Розово-красный (желчный осадок)
• Escherichia coli ATCC 8739* / Хороший / Розово-красный (желчный осадок)
• Proteus vulgaris ATCC 13315 / Хороший / Бесцветный
• Salmonella enteritidis ATCC 13076 / Хороший / Бесцветный
• Shigella dysenteriae ATCC 13313 / Хороший / Бесцветный
• Staphylococcus aureus ATCC 6538 / Слабый / Бесцветный

*По рекомендациям Европейской Фармакопеи инкубировать при 30–35°С 18–72 часа.