VRBG-агар по ISO 21528 Conda 500 г

Среда для культивирования и подсчета энтеробактерий из воды, пищевых продуктов и других материалов

Формула в граммах на литр
• Глюкоза (моногидрат): 10,0 / Панкреатический гидролизат желатина: 7,0
• Хлорид натрия: 5,0 / Дрожжевой экстракт: 3,0
• Соли желчных кислот: 1,5 / Нейтральный красный: 0,03
• Кристаллический фиолетовый: 0,002 / Бактериологический агар: 15,0
• Конечная величина pH 7,4 ± 0,2 при 25°C

Приготовление

Развести 41,5 г среды в 1 литре дистиллированной воды. Тщательно перемешать и нагреть. При частом помешивании довести до кипения. Кипятить в течение минуты до полного растворения. Охладить до 45°C и немедленно разлить в емкости. В качестве альтернативы, стерилизовать среду 15 минут при 118C. Не перегревать! Готовая среда имеет фиолетово-красный цвет, слегка опалесцирует, должна храниться при 8–15°C.

Использование

Агар с желчью, глюкозой и фиолетовым красным, содержащий желчь, фиолетовый и красный краси­тели, основан на Среде МакКонки (кат. № 1052) для обнаружения и подсчета желчетолерантных грамот­рицательных энтеробактерий в молочных и других пищевых продуктах. В этой среде вместо лактозы в ка­честве углевода выступает глюкоза, и среда преимущественно используется в анализах гигиены сырого ма­териала, обработанных пищевых продуктов и растений.

Группа энтеробактерий включает ферментирующие лактозу колиформные бактерии, а также Salmonella spp. и Shigella spp., не ферментирующие лактозу.

Панкреатический гидролизат желатина и дрожжевой экстракт являются источниками питательных веществ, необходимых для роста микроорганизмов: азота, витаминов, минеральных солей и аминокислот. Глюкоза – ферментируемый углевод, источник углерода и энергии. Организмы, ферментирующие глюкозу, формируют красные колонии в присутствии индикатора рН – нейтрального красного. Соли желчных кислот кристалли­ческий фиолетовый ингибируют грамположительные микроорганизмы. Хлорид натрия поддерживает ос­мотический баланс.

Для тестировании гигиенического состояния сырых овощей больше подходит среда Агар с желчью, лак­тозой и фиолетовым красным (кат. № 1093), поскольку среди природной микрофлоры доминируют орга­низмы, не ферментирующие лактозу, но утилизирующие глюкозу, как например, Pseudomonas spp., которые могут легко перерасти индикатор на агаре с желчью, глюкозой и фиолетовым красным.

Европейская Фармакопея 7.0 рекомендует следующее тестирование продуктов на наличие толерантных к желчи грамотрицательных бактерий. 1 г соответствующего продукта инокулировать в Бульон Мосселя (кат. № 1202) и инкубировать при 30–35°C в течение 24–48 часов. После этого пересеять на чашки с Агаром с желчью, глюкозой и фиолетовым красным. Инкубировать при 30–35°C 18–24 часа. Исследуемый продукт не содержит указанных микроорганизмов в случае отсутствия роста колоний.

ISO 21528 также рекомендует использовать эту среду в качестве селективной. При этом в случае, если подсчет энтеробактерий ведется для анализа гигиенической чистоты продукта, инкубирование должно производиться при 37°C. При 30°C инкубировать в случае преследования технологических целей и присутствия психротрофных энтеробактерий.

Удобно использовать метод разливания на чашки, при котором в стерильную чашку Петри вносится 1 мл нужного разведения, добавляется 15 мл среды, охлажденной до 45–50°C, и после осторожного вращения оставляется затвердевать. Сразу после затвердевания налить второй слой среды толщиной 5 мм. Дать затвердеть. Инкубировать 18–24 часа при температуре 35±2°C.

Метод глубинного посева подавляет рост грамотрицательных неферментирующих бактерий благодаря созданию анаэробных условий. Таким образом, стимулируется ферментация глюкозы, что приводит к образованию четко различимых фиолетово-красных колоний, окруженных зоной такого же цвета. Отметим, что колиформы будут ферментировать глюкозу и образовывать кислоту с выделением или без выделения газа. На этой среде также растут Klebsiella spp. и Citrobacter spp., которые более термоустойчивы, чем колиформы, и могут указывать на дефект производственного процесса (недостаточная термообработка продуктов).

Микробиологический тест

Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах после инкубации при температуре 30–35°C и наблюдались через 18–24 часа (в соответствии с Европейской Фармакопеей 7.0).

Микроорганизмы / Рост / Цвет колоний
• Escherichia coli ATCC 11775* / Хороший / Красный
• Escherichia coli ATCC8739* / Хороший / Красный
• Salmonella gallinarum NCTC 9240* / Хороший / Красный
• Staphylococcus aureus ATCC 6538 / Ингибируется / –
• Shigella flexneri ATCC 29903* / Хороший / Красный
• Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 / Хороший / –
• Enterococcus faecalis ATCC 29122 / Ингибируется / –

*Согласно ISO 21528 инкубировать при 37°C 24±2 часа.